产品目录

QuickStar DNA Polymerase是Taq酶抗体和Taq DNA聚合酶的混合制品，适用于HotStart PCR。使用Taq酶抗体进行PCR扩增时，高温变性前由于Taq酶抗体与Taq酶结合抑制DNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq酶抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到热启动效果。使用本制品无需特殊地对Taq酶抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。

QuickStar DNA Polymerase具有5'→3' DNA聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，无3'→5'外切酶活性，酶延伸速度2kb/min，可以扩增长度达5kb的片段。扩增得到的PCR产物3'端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本制品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

• 经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
  
• 经检测无外源核酸酶活性；
  
• PCR方法检测无宿主残余DNA；
  
• 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

• 配制PCR反应体系
  

  成分	用量	终浓度
  10×PCR Buffer	5μL	1×
  dNTP Mix(10mM each)	1μL	200μM each
  Forward Primer，10μM	2μL	0.4μM
  Reverse Primer，10μM	2μL	0.4μM
  Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μL
  QuickStar DNA Polymerase(5U/μL)	0.25～0.5μL	1.25～2.5U/50μL
  ddH2O	至50μL

  • 可以在室温下配制反应液，须将试剂置于冰上。
    
  • 本制品的10×PCR Buffer中含有15mM Mg²⁺。
• 设置PCR反应程序
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	94℃	2min	1
  变性	94℃	30s	25～35
  退火	55～65℃	30s
  延伸	72℃	30s
  终延伸	72℃	2min	1

  • 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度。
    
  • 延伸时间应根据所扩增片段大小设定。
    
  • 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。